光片顯微鏡的使用體驗可能感覺與傳統(tǒng)顯微鏡特別不同,因為大多數(shù)設(shè)置都是*數(shù)字化的,沒有目鏡,所以無法通過眼睛快速檢查樣品的位置和方向。此外,位移臺的控制可能與傳統(tǒng)顯微鏡的界面也有很大不同??焖賿呙铇悠氛麄€深度的能力,無需像共聚焦顯微鏡那樣等待掃描完成,使得光片顯微鏡的工作流程快速且直接。同樣,快速的數(shù)據(jù)獲取速度使得實驗?zāi)軌蚩焖龠B續(xù)地進行。然而,快速的數(shù)據(jù)獲取會導(dǎo)致大量數(shù)據(jù)迅速積累,用戶需在謹(jǐn)慎考慮數(shù)據(jù)存儲與數(shù)據(jù)處理能力的情況下方可進行長時間拍攝。
在普通的寬場熒光顯微鏡中,安裝好的樣品被放置在顯微鏡臺上,然后從上面或下面(垂直或倒置)進行照明和檢測。光片顯微鏡由于可以擁有不同的照明路徑,給樣品的放置增加了另一個自由度,從而允許用戶準(zhǔn)確定位樣品。此外,多組數(shù)據(jù)可以從不同的路徑獲得,并拼合在一起,也能使顯微鏡的穿透深度固定的情況下獲得更大的成像范圍。同時,在光片顯微鏡中,樣品的放置方向也比經(jīng)典的單透鏡顯微鏡更為重要。用戶需要使樣品相對于照明軸和檢測軸方向正確:光片需要在不通過樣品的高折射或高吸收結(jié)構(gòu)的情況下到達感興趣的區(qū)域。
與傳統(tǒng)熒光顯微技術(shù)不同的是,圖像采集過程中的第一個關(guān)鍵步驟是光片的校準(zhǔn)。在光片顯微鏡中,我們需要辨別調(diào)整光片的基本參數(shù),即高度和厚度,以及正確地將光片定位在檢測透鏡的焦平面上。這三個步驟對于獲得光片好的層析能力以及可靠性、一致性高的結(jié)果都是不可少的。此外,光片的校準(zhǔn)和對其參數(shù)的了解可能是決定進一步實驗策略的關(guān)鍵性先決條件,例如調(diào)整軸向的步進和之后的分析步驟。